o c Insertos Tinciones Hematológicas 01 (55) Lerdo # 30 Cuajimalpa México, D.F TINCIÓN DE WRIGHT WRIGHT BUFFER

Transcripción

1 c ma o c TINCIÓN DE WRIGHT WRIGHT BUFFER ANTES DE USAR: a) Dejar madurar el colorante de Wright 5 días después de su elaboración. Insertos Tinciones Hematológicas. Colocar el frotis perfectamente seco en la charola de tinción y cubrir con una capa gruesa de colorante (2 ml aproximadamente). Teñir durante 5 minutos. Agregar solución buffer hasta que se forme un menisco (+ 5 ml). Soplar con una pipeta suavemente para mezclar las soluciones. Teñir durante 6 minutos. Lavar con agua destilada evitando la precipitación del colorante. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No (55) Lerdo # 30 Cuajimalpa México, D.F hoja de 2

2 TINCIÓN PARA RETICULOCITOS, HEMOGLOBINA H Y HEMOGLOBINAS INESTABLES INDUCCIÓN DE DREPANOCITOS Solución de metabisulfito de sodio al 2% SOLUCIÓN COLORANTE AZUL DE CRESILO BRILLANTE AL %. Colocar, en un tubo de ensayo 2 gotas de sangre y 2 gotas de la solución colorante y mezclar. Incubar a 37 ºC manteniendo tapado el tubo para evitar la evaporación. Realizar frotis de la mezcla a los 5 minutos,, 2, 3 y 4 horas de incubación. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No.. Hacer conteo de reticulocitos en 000 células de cada frotis. Colocar en un tubo: a) Metabisulfito de sodio b) Agua destilada 0.05gr 5 ml Preparar al momento de usarse NOTA: Correr la prueba paralelamente con una sangre normal. Reticulocitos en PORCENTAJE hacer la siguiente regla de tres 000 células 00% Nº de Reticulocitos contados. Colocar gota de solución de metabisulfito de sodio al 2% en un portaobjetos y una gota de sangre anticoagulada. Mezclar con un aplicador. Tomar una pequeña porción con la orilla de un cubreobjetos y colocar éste cuidadosamente sobre un portaobjetos, evitando la formación de burbujas. Sellar las orillas del cubreobjetos con parafina fundida. Observar al microscopio a los 5, 30, 60 minutos, 2 horas y 24 horas X = Reticulocitos en porcentaje Reticulocitos ABSOLUTOS hacer la siguiente regla de tres Valor total de eritrocitos en BH 00% Valor de reticulocitos en porcentaje X = Reticulocitos absolutos hoja 2 de 2 hoja 3 de 2

3 TINCIÓN DE PERLS TINCIÓN DE MIELOPEROXIDASA SOLUCIÓN A (FERROCIANURO DE POTASIO AL 4%) SOLUCIÓN B (HCL AL 4% ROJO RAPIDO NUCLEAR FORMOL (Conservación de reactivos a temperatura ambiente en lugar fresco y seco) SOLUCIÓN FIJADORA SOLUCIÓN DE COLORANTE SOLUCIÓN DE SAFRANINA Preparación solución C Colocar en un vaso de precipitado: - Solución A (Ferrocianuro de potasio) - Solución B (HCl al 4%) (Preparar la solución al momento de usarse) Conservación: 25 ml 25 ml Solución fijadora a 4 ºC Colorantes a temperatura ambiente en lugar fresco y seco.. Fijar los frotis con vapores de formol por 5 minutos ( aproximadamente de 6 a 8 gotas de Formol) Vaciar la mezcla de incubación solución C precalentada a 56 ºC en un vaso de Copplin, inmediatamente colocar los frotis (previamente fijados) y tapar Incubar por 30 minutos. Contrateñir con solución de rojo rápido nuclear por 5 minutos. Cubrir en resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No Fijar los frotis durante dos minutos (utilizar solucion fijadora a temperatura ambiente). Secar perfectamente al aire. Sumergir en la solución colorante durante 30 segundos. Secar perfectamente al aire. Contrateñir por 30 segundos con solución de safranina. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No.. Precaución: La solución de tinción deberá ser manejada con cuidado por contener material cancerígeno. NOTA: La solución C debe ser desechada en residuos tóxicos hoja 4 de 2 hoja 5 de 2

4 ALFA NAFTIL ACETATO ESTERASA (ANAE) TINCIÓN DE PAShiff SOLUCIÓN FIJADORA SOLUCIÓN DE ÁCIDO PERYÓDICO AL % REACTIVO DE SHIFF REACTIVO DE HEMATOXILINA DE GILL Solución fijadora (Mantener a 4 º C) a-naphthyl acetato (Mantener a 4 º C) Etilen glicol monometil éter Amortiguador de fosfatos ph 6 Verde de Metilo al % Hidroxido de sodio NaOH SOLUCIÓN DE INCUBACIÓN Preparación 4% (Agregar al tubo ) Agua Destilada Conservación a 4 ºC: - Solución fijadora - Solución de ácido peryódico al % - Reactivo de shiff gr Tubo Preparación de hexazotizada - Hematoxilina de Gill a temperatura ambiente en un lugar fresco y seco. al 4% Tubo 2 Preparación de Solución de α-naphthyl acetato. Fijar los frotis por 5 minutos (utilizar la solución fijadora a temperatura ambiente). α-naphthyl acetato Etilén glicol monometil eter Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivos: Colocar en ácido peryódico durante 0 minutos (utilizar la solución a temperatura ambiente) Lavar con agua de la llave y secar perfectamente. a. b. c. d. Sumergir en el reactivo de Shiff por 20 minutos. (utilizar el reactivo a temperatura ambiente). Lavar con agua de la llave y secar perfectamente. Contrateñir con hematoxilina de Gill por 0 minutos. Lavar con agua de la llave y secar perfectamente. 0. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No.. hoja 6 de mg.25 ml Amortiguador de fosfatos /5 M, ph 6 25 ml Tubo : hexazotizada.5 ml Tubo 2: Solución de α-naphthyl acetato.25 ml Agregar 4 gotas de NaOH N y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas) Fijar los frotis con solución fijadora a 4 ºC por 30 segundos. Secar a temperatura ambiente. Colocar los frotis en la mezcla de incubación a 37 ºC por 45 minutos en la oscuridad. Contrateñir con verde de metilo al % durante 5 minutos. Secar a temperatura ambiente. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No.. hoja 7 de 2

5 ESTERSAS DOBLES Solución fijadora (Mantener a 4º C) a-naphthyl acetato (Mantener a 4º C) Etilen glicol monometil éter Amortiguador de fosfatos ph 6 Hidroxido de sodio NaOH Amortiguador de Fosfatos ph 4 NN. Dimetilformamida Naftol ASD (Mantener a 4º C) Fast Blue BBN (Mantener a 4º C) SOLUCIÓN DE INCUBACIÓN 2 Tubo 3 (Colocar los reactivos en el siguiente orden y disolver perfectamente) NN. Dimetilformamida Naftol ASD Fast Blue BBN.25 ml g g Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivos SOLUCIÓN DE INCUBACIÓN Preparación 4% (Agregar al tubo ) Agua Destilada gr a. b. c. al 4% recién preparado 25 ml.25 ml PASO 2 Tubo Preparación de hexazotizada Amortiguador de fosfatos /5M ph 4 Tubo 3 Mezclar y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas) Introducir los frotis ya tratados con ANAE en la solución de incubación 2, e incubar por 25 minutos a 37 ºC en la oscuridad. Enjuagar y dejar secar a temperatura ambiente. Cubrir con resina sintética (Permount) y cubreobjetos del No.. Tubo 2 Preparación de Solución de α-naphthyl acetato α-naphthyl acetato Etilén glicol monometil éter 50 mg.25 ml Colocar en un matraz Erlenmeyer en orden los siguientes reactivos a. Amortiguador de fosfatos /5 M, ph 6 25 ml b. Tubo : hexazotizada.5 ml c. Tubo 2: Solución de α-naphthyl acetato.25 ml d. Agregar 4 gotas de NaOH N y filtrar (en una caja para 5 portalaminillas) PASO. Fijar los frotis con solución fijadora a 4 ºC por 30 segundos. Secar a temperatura ambiente. Colocar los frotis en la mezcla de incubación a 37 ºC por 45 minutos en la oscuridad. Secar a termperatura ambiente hoja 8 de 2 hoja 9 de 2

6 La esencia del diagnóstico hematológico se encuentra en el laboratorio COMAC MEXICO es una empresa mexicana dedicada a la fabricación y distribución de reactivos y material de laboratorio clínico en todo el territorio nacional. Fundada en el año 2009 con la finalidad de suministrar reactivos de la más alta calidad que permitan llegar al diagnóstico hematológico correcto. Los asistentes al curso de Tinciones Hematológicas podrán obtener nuestros colorantes a un costo especial, les adjunto el costo que normalmente cuestan: Precios de lista Wright con Buffer 000mL $ Wrjgth con Buffer 500mL $ Citoquimica para Mieloperoxidasa 00mL $, Paschif 00mL $, Perls 00mL $, Azul de cresilo brillante 00ml $ Esterasas (ANAE) 3 pruebas $ Total $5, Precios mas el 6% de IVA KENDALL hoja 0 de 2 hoja de 2

7 Sabemos que un colorante debe ser de excelente calidad en el área de hematología para poder observar la morfología de serie roja y serie blanca, y poder llegar a un diagnostico preciso, recordando la infinidad de patologías que podemos encontrar y algunas no poderlas diagnosticar por una mala tinción. En el laboratorio utilizamos el colorante de Wright de la familia de Romanosky, si su elaboración se realiza con los materiales adecuados como son el colorante de Wright en polvo, metanol y un buffer con ph especifico tendremos la coloración correcta en cada estructura. Le ofrecemos a usted un costo especial para el laboratorio de consumos frecuentes de este colorante. Cantidad Descripción Catalogo Costo Unitario Total Wright preparado 500mL Buffer 8 ph para Wright 500mL CM500WR-C CM500WR-BF $440,00 $440,00 2 Wright preparado 500mL Buffer 8 ph para Wright 500mL CM500WR-C CM500WR-BF $200,00 $400,00 Wright preparado 000mL Buffer 8 ph para Wright 000mL CM000WR-C CM000WR-BF $700,00 $700,00 2 Wright preparado 000mL Buffer 8 ph para Wright 000mL CM000WR-C CM000WR-BF $350,00 $700,00 Nota: Para respetar el costo especial, el consumo mínimo es de 2 L por mes.